Is gníomhaire laghdaithe a úsáidtear go coitianta é déthiotreitol (DTT), ar a dtugtar an breiseán glas nua freisin. Is comhdhúil orgánach mhóilíneach bheag í le dhá ghrúpa mercaptan (-SH). Mar gheall ar a airíonna laghdaithe agus a chobhsaíocht, úsáidtear DTT go forleathan i dturgnaimh bhithcheimice agus bitheolaíochta móilíní.
Is é príomhról DTT ná bannaí déshuilfíde a laghdú i bpróitéiní agus i mbithmhóilíní eile. Is cuid thábhachtach de fhilleadh agus de chobhsaíocht próitéine é an nasc déshuilfíde, ach faoi choinníollacha turgnamhacha áirithe, amhail anailís SDS-PAGE inlaghdaithe, athchuingriú agus fillte próitéine, is gá an nasc déshuilfíde a laghdú go dhá ghrúpa thiol chun struchtúr spásúil an phróitéine a nochtadh. Is féidir le DTT imoibriú le bannaí déshuilfíde chun iad a laghdú go grúpaí mercaptan, rud a osclaíonn struchtúr spásúil an phróitéine agus a fhágann go bhfuil sé éasca anailís agus ionramháil a dhéanamh air.
Is féidir DTT a úsáid freisin chun gníomhaíocht agus cobhsaíocht einsíme a chosaint. I roinnt imoibrithe atá catalaíoch ag einsímí, féadfaidh an t-ocsaídeoir gníomhaíocht an einsíme a laghdú. Is féidir le DTT imoibriú le hocsaídeoirí chun iad a laghdú go substaintí neamhdhíobhálacha, rud a chosnaíonn gníomhaíocht agus cobhsaíocht an einsíme.
I gcomparáid le gníomhairí laghdaithe traidisiúnta amhail β-mearcaptoeatánól (β-ME), meastar gur gníomhaire laghdaithe níos sábháilte agus níos cobhsaí é DTT. Ní hamháin go bhfuil sé cobhsaí i dtuaslagán uiscí, ach coinníonn sé a airíonna laghdaithe faoi theocht ard agus faoi choinníollacha aigéad-bonn freisin.
Tá úsáid DTT sách simplí. Go ginearálta, déantar DTT a thuaslagadh i maolán cuí agus ansin cuirtear leis an gcóras turgnamhach é. Ní mór an tiúchan is fearr de DTT a chinneadh de réir an turgnaimh shonraigh, agus úsáidtear é de ghnáth sa raon 0.1-1mM. Is féidir le tiúchain níos ísle fo-iarsmaí ar fhás cille a laghdú agus cíteatocsaineacht a laghdú mar gheall ar ró-léiriú próitéiní sprice. Féadfaidh tiúchain níos airde ualach meitibileach iomarcach cille a chur faoi deara, rud a théann i bhfeidhm ar fhás cille agus ar éifeachtúlacht léirithe.
Is féidir an tiúchan is fearr a chinneadh ná leibhéal léirithe an phróitéine sprice a mheas trí thástálacha ionduchtaithe IPTG a dhéanamh ag tiúchain éagsúla. Is féidir tástálacha cultúir ar scála beag a dhéanamh ag baint úsáide as raon tiúchain IPTG (m.sh. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, srl.) agus is féidir an éifeacht léirithe ag tiúchain éagsúla a mheas trí leibhéal léirithe an phróitéine sprice a bhrath (m.sh. braiteadh Western blot nó braiteadh fluaraiseachta). De réir na dtorthaí turgnamhacha, roghnaíodh an tiúchan leis an éifeacht léirithe is fearr mar an tiúchan is fearr.
Ina theannta sin, is féidir leat tagairt a dhéanamh don litríocht ábhartha nó do thaithí saotharlanna eile chun tuiscint a fháil ar an raon tiúchana IPTG a úsáidtear go coitianta faoi dhálaí turgnamhacha comhchosúla, agus ansin an raon a bharrfheabhsú agus a choigeartú de réir na riachtanas turgnamhacha.
Tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara go bhféadfadh an tiúchan is fearr a bheith éagsúil ag brath ar chórais éagsúla léirithe, próitéiní sprice, agus coinníollacha turgnamhacha, mar sin is fearr é a bharrfheabhsú de réir cás ar chás.
Mar achoimre, is gníomhaire laghdaithe a úsáidtear go coitianta é DTT ar féidir é a úsáid chun bannaí disulfíde a laghdú i bpróitéiní agus i mbithmhóilíní eile agus chun gníomhaíocht agus cobhsaíocht einsímí a chosaint. Úsáidtear go forleathan é i dturgnaimh bhithcheimice agus bitheolaíochta móilíní.
Am an phoist: 28 Meán Fómhair 2023