Is gníomhaire laghdaitheora a úsáidtear go coitianta é Dithiothreitol (DTT), ar a dtugtar an breiseán glas nua freisin.Is cumaisc orgánach móilíneach beag é le dhá ghrúpa mercaptan (-SH).Mar gheall ar a n-airíonna laghdaithe agus cobhsaíochta, úsáidtear DTT go forleathan i dturgnaimh bhithcheimic agus bitheolaíochta mhóilíneach.
Is é príomhról DTT ná bannaí disulfide i bpróitéiní agus i mbithmhóilíní eile a laghdú.Is cuid thábhachtach de fhilleadh próitéine agus de chobhsaíocht é an banna disulfide, ach faoi choinníollacha turgnamhacha áirithe, mar shampla anailís SDS-LEATHANACH in-laghdaithe, recombination próitéin agus fillte, is gá an banna disulfide a laghdú go dtí dhá ghrúpa thiol chun struchtúr spásúil a réiteach. an phróitéin.Is féidir le DTT freagairt le bannaí disulfide chun iad a laghdú go grúpaí mercaptan, rud a fhágann go n-osclaítear struchtúr spásúil na próitéine agus go mbeidh sé éasca anailís agus ionramháil a dhéanamh.
Is féidir DTT a úsáid freisin chun gníomhaíocht agus cobhsaíocht einsíme a chosaint.I roinnt imoibrithe einsím-catalyzed, d'fhéadfadh gníomhaíocht an einsím a laghdú ag an oxidant.Is féidir le DTT imoibriú le ocsaídeoirí chun iad a laghdú go substaintí neamhdhíobhálach, rud a chosnaíonn gníomhaíocht agus cobhsaíocht na heinsíme.
I gcomparáid le gníomhairí laghdaithe traidisiúnta mar β-mercaptoethanol (β-ME), meastar gur gníomhaire laghdaitheach níos sábháilte agus níos cobhsaí é DTT.Ní hamháin go bhfuil sé cobhsaí i dtuaslagán uiscí, ach coinníonn sé a chuid airíonna laghdaitheacha freisin faoi choinníollacha teocht ard agus aigéad-bun.
Tá úsáid DTT sách simplí.Go ginearálta, déantar DTT a dhíscaoileadh i maolán cuí agus ansin cuirtear leis an gcóras turgnamhach é.Is gá an tiúchan is fearr de DTT a chinneadh de réir an turgnaimh shonracha, agus úsáidtear é go ginearálta sa raon 0.1-1mM.Is féidir le tiúchan níos ísle éifeachtaí díobhálacha ar fhás cille a laghdú agus is féidir leo cíteatocsaineacht a laghdú mar gheall ar ró-eisiúint próitéiní.D'fhéadfadh tiúchan níos airde a bheith ina chúis le ró-ualach meitibileach cille, rud a chuireann isteach ar fhás cille agus éifeachtúlacht léirithe.
Is é an bealach chun an tiúchan is fearr a chinneadh ná leibhéal slonn an phróitéin sprice a mheas trí thástálacha ionduchtaithe IPTG a dhéanamh ag tiúchan éagsúla.Is féidir tástálacha cultúir ar scála beag a dhéanamh trí úsáid a bhaint as raon comhchruinnithe IPTG (m.sh. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, etc.) agus is féidir an éifeacht slonn ag tiúchana éagsúla a mheas trí leibhéal slonn na spriocphróitéin a bhrath (m.sh. blot nó braite fluaraiseachta).De réir na dtorthaí turgnamhacha, roghnaíodh an tiúchan leis an éifeacht slonn is fearr mar an tiúchan is fearr.
Ina theannta sin, is féidir leat tagairt a dhéanamh freisin don litríocht ábhartha nó do thaithí saotharlanna eile chun raon tiúchan IPTG a úsáidtear go coitianta a thuiscint faoi choinníollacha turgnamhacha den chineál céanna, agus ansin uasmhéadú agus coigeartú de réir na riachtanas turgnamhach.
Tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara go bhféadfadh an tiúchan is fearr a bheith éagsúil ag brath ar chórais slonn éagsúla, spriocphróitéiní, agus coinníollacha turgnamhacha, agus mar sin is fearr leas iomlán a bhaint as cás ar chás.
Go hachomair, is gníomhaire laghdaitheora a úsáidtear go coitianta é DTT is féidir a úsáid chun bannaí disulfide i bpróitéiní agus i mbithmhóilíní eile a laghdú agus chun gníomhaíocht agus cobhsaíocht einsímí a chosaint.Úsáideadh go forleathan é i dturgnaimh bhithcheimic agus bitheolaíocht mhóilíneach.
Am postála: Meán Fómhair-28-2023