Conas an tiúchan is fearr a chinneadh?
Maidir leis an inducer IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), dá airde an tiúchan, is amhlaidh is fearr.Braitheann an tiúchan is fearr ar na coinníollacha turgnamhacha sonracha agus ar an éifeacht ionduchtaithe atá ag teastáil.
Go ginearálta, úsáidtear an tiúchan IPTG sa raon 0.1-1 mM.Is féidir le tiúchan níos ísle éifeachtaí díobhálacha ar fhás cille a laghdú agus is féidir leo cíteatocsaineacht a laghdú mar gheall ar ró-eisiúint próitéiní.D'fhéadfadh tiúchan níos airde a bheith ina chúis le ró-ualach meitibileach cille, rud a chuireann isteach ar fhás cille agus éifeachtúlacht léirithe.
Is é an bealach chun an tiúchan is fearr a chinneadh ná leibhéal slonn an phróitéin sprice a mheas trí thástálacha ionduchtaithe IPTG a dhéanamh ag tiúchan éagsúla.Is féidir tástálacha cultúir ar scála beag a dhéanamh trí úsáid a bhaint as raon comhchruinnithe IPTG (m.sh. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, etc.) agus is féidir an éifeacht slonn ag tiúchana éagsúla a mheas trí leibhéal slonn na spriocphróitéin a bhrath (m.sh. blot nó braite fluaraiseachta).De réir na dtorthaí turgnamhacha, roghnaíodh an tiúchan leis an éifeacht slonn is fearr mar an tiúchan is fearr.
Ina theannta sin, is féidir leat tagairt a dhéanamh freisin don litríocht ábhartha nó do thaithí saotharlanna eile chun raon tiúchan IPTG a úsáidtear go coitianta a thuiscint faoi choinníollacha turgnamhacha den chineál céanna, agus ansin uasmhéadú agus coigeartú de réir na riachtanas turgnamhach.
Tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara go bhféadfadh an tiúchan is fearr a bheith éagsúil ag brath ar chórais slonn éagsúla, spriocphróitéiní, agus coinníollacha turgnamhacha, agus mar sin is fearr leas iomlán a bhaint as cás ar chás.
Am postála: Meán Fómhair-28-2023